تفاصيل الوثيقة

نوع الوثيقة : رسالة جامعية 
عنوان الوثيقة :
تقييم اضطرابات الجين الواحد على مستوى الخلية الواحدة، لأمراض فقر دم حوض البحر الابيض المتوسط وفقر الدم المنجلي
Evaluation of Single Gene Disorders at the Single Cell level; Application to β thalassemia and Sickle Cell Disease
 
الموضوع : كلية العلوم - قسم كيمياء حيوية 
لغة الوثيقة : العربية 
المستخلص : تعد البحوث المتعلقة بالدراسات وحيدة الخلية ذات أهمية كبيرة، كما وتشهد هذه البحوث نموا مستمرا في مجال الفحوصات البيولوجية الجزيئية وايضا في المجالات التشخيصية.تعتبر تقنية الكشف عن الطفرات الوراثية من الخلايا المفردة تقنية بالغة الدقة والحساسية ولديها تطبيقات متنوعة في مجال الأبحاث الطبية إلى جانب إجراءات التشخيص السريري. تهدف هذه الدراسة بشكل اساسي لتطوير نوع معين من الفحوصات المخبرية ذو كفاءة عالية ولديه القدرة على الكشف عن الطفرات الوراثية في الخلية الاحادية المفردة، والذي من الممكن استخدامه كخطوة اولية اساسية لأجراء هذا النوع من التحاليل الدقيقة. كما انه تم فحص وتحليل انواع مختلفة من الخلايا من مصادر متنوعة باستخدام هذه التقنية، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية، خلايا الشدق(باطن الخد)، الخلايا الليفية المستخرجة من الجلد وخلايا سرطان الدم من نوع K562 و من الخلايا الجنينة المستخلصة من اجنة الانسان. تمت دراسة كل نوع من هذه الخلايا على حدة باستخدام عدة طرق واساليب للفحص المخبري (بروتكولات) وذلك لايجاد واستنباط تقنيات ذات نتائج عالية الدقة والفعالية. سعيا منا لتحقيق هذا الهدف قمنا بعمل دراسة وراثية مستفيضة للعامل الوراثي المسؤول عن انتاج خضاب الدم (الهيموجلوبين) كنموذج اولي للدراسة و توثيق الطفرات الوراثية فيه والمسببة لمرضي فقر دم البحر المتوسط (بيتا ثلاسيميا) وفقر الدم المنجلي. وقد وضعت خطة منهجية لالية البحث بدأ من تحديد مواقع الطفرات الوراثية الاكثر شيوعا في المنطقة الغربية من المملكة العربية السعودية وذلك باستخدام تقنية تسلسل الحمض النووي. تم اختيارالعامل الوراثي المسؤول عن انتاج خضاب الدم( الهيموجلوبين) كنموذج اولي للدراسة، بناءا على حقيقة ارتفاع معدلات الاصابة بامراض الدم الوراثية (مرض فقر دم البحر المتوسط وفقر الدم المنجلي) في المملكة العربية السعودية، وطبيعة الامراض الناجمة عن هذه الطفرات الوراثية والتي تعد من الامراض الوراثية احادية الجين التي يمكن تحديد الطفره الوراثية المسببة لها بسهولة ودقة متناهية. وقد قمنا بتصميم وتطوير نوع معين من الفحوصات المخبرية الوراثية وذلك للتحقق والكشف السريع عن وجود اي طفرات وراثية و ذلك باستخدام تقنية التنميط الجيني(TaqMan® SNP genotyping assay) والتي تعتمد اساسا على البلمرة الكمية ((qPCR للحمض النووي المنقوص الاكسجين(DNA). كما وقد تم فحص 257 مريضا من مراجعين وحدة نقل الدم وعيادة امراض الدم للاطفال في مستشفى الملك عبد العزيز الجامعي، و تم تحديد الطفرات الوراثية الاكثر شيوعا في العامل الوراثي المسبب لانتاج الهيموجلوبين والتي تؤدي الى الاصابة بمرض فقر دم البحر المتوسط ومرض فقر الدم المنجلي. اعتمادا على نتائج الفحوصات ا المخبرية لدينا قمنا بتحديد الطفرة الوراثية من نوع rs33915217 كواحدة من اكثر الطفرات الوراثية شيوعا في مجتمع الدراسة بنسبة تكرار 26%. وأظهرت النتائج ان تقنية التنميط الجيني (TaqMan® SNP genotyping assay) هي، طريقة سريعة دقيقة وفعالة من حيث التكلفة لفحص الأولي مرض فقر دم البحر المتوسط والتي من شأنها أن تقلل الحاجة إلى التسلسل المباشر لهذا الموورث المسؤول عن انتاج الهيموجلوبين. سعيا لتطبيق فحوصات التنميط الجيني TaqMan® SNP genotyping assay على مستوى خلية واحدة، تم اختبار ستة ‘طرق للفحص الوراثي للخلية الواحدة باستخدام عدة انواع من الخلايا من مصادر مختلفة . وقد تم استخلاص تقنية تعد هي الانسب لتحليل الحمض النووي المنقوص الاكسجين(DNA ) في الخلية المفردة ، الا وهو الجمع بين استخدام طريقة التحليل القلوي (ALB) مع dithiothreitol (DTT) كمادة مضافة. وقد تبين لنا ان الحمض النووي المعزول بهذه الطريقة كان من الممكن استخدامه التنميط الجيني TaqMan® SNP genotyping assay فضلا عن تقنية مضاعقة الجينوم الكلي (WGA). كما انه من الضروري توضيح اننا قد قمنا بعزل الخلايا الجنينية من اجنة الانسان وتحليلها باستخدام طريقة التحليل المشار اليها مسبقا ومن ثم مضاعفة الحمض النووي المستخلص من هذه الاخلايا باستخدام تقنية التضاعف الكلي للماده الوراثيــــة. ((WGA. كما انه قد جرى استخدام الحمض النووي المستخلص من الخلايا الجنينية و الذي تمت مضاعفته مسبقا في تقنية التهجين المقارن وذلك لفحص اي اختلالات في الصبغيات وكذلك في التنميط الجيني. وفي الختام، فإن نتائج هذه الدراسة تضع الأسس الاولية لأبحاث الخلايا المفردة في جامعة الملك عبد العزيز، ونقل هذه التقنية لدينا. فضلا عن ان الابحاث المستقبلية في هذا المجال ستكون قادره على الاستفادة من هذه التجارب والفحوصات التي طورت في هذه الدراسة ،وذلك في محاولة لمعالجة المعضلات البحثية المتعلقة بالتنوع الخلوي و التزيق الوراثي. 
المشرف : أ.د جلال الدين أعظم خان 
نوع الرسالة : رسالة دكتوراه 
سنة النشر : 1437 هـ
2016 م 
المشرف المشارك : أ.د. عادل محمد أبو زنادة 
تاريخ الاضافة على الموقع : Thursday, September 29, 2016 

الباحثون

اسم الباحث (عربي)اسم الباحث (انجليزي)نوع الباحثالمرتبة العلميةالبريد الالكتروني
وسام علي الوزنيAlwazani, Wissam Aliباحثدكتوراه 

الملفات

اسم الملفالنوعالوصف
 39395.pdf pdf 

الرجوع إلى صفحة الأبحاث